ПЕРВЫЙ ОПЫТ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

DOI: 10.22138/2500-0918-2018-15-6-860-867
УДК 616-006.6-091

С.В. Сазонов, А.А. Бриллиант, Ф.А. Фадеев, С.М., Демидов, С.Л. Леонтьев

 

Институт медицинских клеточных технологий, г. Екатеринбург, Российская Федерация;
Уральский государственный медицинский университет, г. Екатеринбург, Российская Федерация

Резюме. Цель исследования — оценить изменения рецепторного аппарата клеток рака молочной железы при создании клеточной культуры Люминального B подтипа. Материалы и методы. Из опухоли приготавливали гистологические препараты, проводили иммуногистохимические исследования по стандартной методике для установления подтипа рака. Иммуногистохимические реакции проводили в автостейнере “Ventana”, США. Часть опухоли диссоциировали, полученные опухолевые клетки культивировали на протяжении 5 пассажей. Клетки выделяли с использованием трипсина с ЭДТА (0,25%), диспазы и 200 мкл ДНКазы I (концентрация 1 мг/мл). Для получения культуры маммосфер разводили клеточный осадок в полной среде Mammocult, переносили в неадгезивный планшет. Посевная доза — не более 4×103 клеток/см2. Для получения культуры опухолевых клеток эпителиальной природы последние высаживались на культуральный пластик, покрытый тонким слоем коллагена. Клеточный осадок разводили в полной среде Epi-Cult-В с добавлением 5% FBS. Посевная доза 1-5×104 клеток/см2. Инкубировали 24 часа при 37°С и 5% СО2, затем заменяли среду на бессывороточную. Клетки для проведения иммуноцитохимических исследований наносились на положительно заряженные адгезивные стекла, Superfrost Plus (Thermo scientific, Германия), фиксировались и окрашивались по обычной методике на автостейнере. Результаты. Цитологическая картина полученных клеток сходна с клетками исходного рака молочной железы, клетки имеют высокое отношение объёма ядра к цитоплазме. Структура полученных одиночных клеток напоминает фибробласты и не отличается на всех этапах культивирования. Для подтверждения эпителиальной природы культивируемых клеток, каждый пассаж тестировался на экспрессию цитокератинов. Во всех пяти пассажах экспрессия цитокератинов обнаружена на большинстве культивируемых клеток. На четвертом пассаже культура клеток наиболее плотная, ядра клеток отличаются по размерам и форме, количество цитоплазмы варьирует. Местами образовался монослой, морфология клеток соответствует клеткам рака молочной железы. В ходе работы получили культуры клеток, которые существенно отличаются рецепторным аппаратом, соответствуют разным иммуногистохимическим подтипам рака молочной железы. Только в результате третьего пассажа получили иммуногистохимический подтип, соответствующий первичной опухоли. Первый, второй и четвертый пассажи дали культуру клеток, с фенотипом характерным для тройного негативного рака молочной железы, отличающуюся от первичной опухоли высокой пролиферацией и отсутствием рецепторов. Таким образом, в результате выполненного исследования выявлено, что рецепторный аппарат культивируемых клеток рака молочной железы Люминального B подтипа может меняться после каждого пассажа.

Ключевые слова: рак молочной железы, рецепторный аппарат, клеточное культивирование, молекулярно-биологический подтип, Люминальный В подтип

Конфликт интересов отсутствует.

Контактная информация автора, ответственного за переписку:
Сазонов Сергей Владимирович
prof-SSazonov@yandex.ru

Дата поступления 27.11.2018

Образец цитирования:
Сазонов С.В., Бриллиант А.А., Фадеев Ф.А., Демидов С.М., Леонтьев С.Л. Первый опыт культивирования клеток рака молочной железы. Вестник уральской медицинской академической науки. 2018, Том 15, №6, с. 860–867, DOI: 10.22138/2500-0918-2018-15-6-860-867


ЛИТЕРАТУРА
1. Cope L.M., Fackler M.J., Lopez-Bujanda Z. et al. Do breast cancer cell lines provide a relevant model of the patient tumor methylome? PloS one. 2014, p. 105545
2. Bahia H., Ashman J.N., Cawkwell L. et al. Karyotypic variation between independently cultured strains of the cell line MCF-7 identified by multicolour fluorescence in situ hybridization. Int. J. Oncol. 2002, No. 20 (3), рp. 489-94.
3. Hollestelle A., Nagel J.H., Smid M., et al. Distinct gene mutation profiles among luminal-type and basal-type breast cancer cell lines. Breast cancer research and treatment. 2010. No. 121. рp. 53-64.
4. Zasadkevich Y.M., Brilliant A.A., Sazonov S.V. Сharacteristics of the relation between epithelial-mesenchimal transition and proliferative activity in breast carcinomas. European Journal of Cancer. 2013. p. 216.
5. Мнихович М.В., Мидибер К.Ю., Галлямова А.Р. и др. Иммуногистохимическая оценка экспрессии кадхерин-катенинового комплекса при раке молочной железы. Журнал анатомии и гистопатологии. 2017. – № 6 (1). – С. 63-68.
6. Арутюнян Е.В., Бриллиант А.А., Новикова Е.А., Сазонов С.В. Некоторые закономерности экспрессии иммуногистохимических маркеров на клетках карциномы молочной железы. Уральский медицинский журнал. 2014. – № 2 (116). – С. 5-8.
7. Бриллиант Ю.М., Бриллиант А.А., Сазонов С.В. Эпителиальные кадгерины и ассоциированные с ним молекулы при инвазивном дольковом раке молочной железы. Архив патологии. 2017. – № 1 (79). – С. 12-18.
8. Сазонов С.В., Бриллиант А.А., Бриллиант Ю.М. Связь состояния пролиферативных процессов и особенностей рецепторного аппарата опухолевых клеток карциномы молочной железы. Гены и клетки. 2017. – № 12 (4). – С. 76-81.
9. Засадкевич Ю.М., Сазонов С.В. Роль молекулы клеточной адгезии Е-кадгерина в онтогенезе человека в норме и патологии. Морфология. 2014. – № 5 (146). – С. 78-82.
10. Засадкевич Ю.М., Бриллиант А.А., Сазонов С.В. Роль кадгеринов в норме и при развитии рака молочной железы. Архив патологии. 2015. – № 3 (77), – С. 57-64.
11. Сазонов С.В., Леонтьев С.Л., Бриллиант А.А. Опыт работы референс-лаборатории по HER2/Neu тестированию карциномы молочной железы в Свердловской области. Вестник Уральской медицинской академической науки. 2013. – № 1 (43). – С. 56-60.
12. Франк Г.А., Андреева Ю.Ю., Виноградов И.Ю., и др. 10 лет тестирования HER2-статуса рака молочной железы в России. Архив патологии. 2012. – Т. 74. – № 5. – С. 3-6. 
13. Tsuda H., Akiyama F., Terasaki H., et al. Detection of HER-2/neu (c-erb B-2) DNA amplification in primary breast carcinoma. Interobserver reproducibility and correlation with immunohistochemical HER-2 overexpression. Cancer. 2001, 92, pр. 2965-74.

Авторы:
Сазонов Сергей Владимирович
Уральский государственный медицинский университет
Заведующий кафедрой гистологии, цитологии и эмбриологии
ГАУЗ СО Институт медицинских клеточных технологий
Заведующий патолого-анатомическим отделением
Доктор медицинских наук, профессор
Российская Федерация, 620137, г. Екатеринбург, ул. Вилонова, 76а
imct@celltechnologies.ru

Бриллиант Александр Александрович
Институт медицинских клеточных технологий
Кандидат биологических наук, старший научный сотрудник
Российская Федерация, 620137, г. Екатеринбург, ул. Вилонова, 76а
alex_brilliant@mail.ru

Фадеев Федор Алексеевич
Институт медицинских клеточных технологий
Кандидат биологических наук, заведующий лабораторией клеточных культур
Российская Федерация, 620137, г. Екатеринбург, ул. Вилонова, 76а
imct@celltechnologies.ru

Демидов Сергей Михайлович
Институт медицинских клеточных технологий
Доктор медицинских наук, профессор, ведущий научный сотрудник
Российская Федерация, 620137, г. Екатеринбург, ул. Вилонова, 76а
imct@celltechnologies.ru

Леонтьев Сергей Леопольдович
Институт медицинских клеточных технологий
Доктор медицинских наук, профессор, главный врач института
Российская Федерация, 620137, г. Екатеринбург, ул. Вилонова, 76а
imct@celltechnologies.ru

 

 
 
 

Авторизация