МОРФОМЕТРИЧЕСКИЕ АСПЕКЫ ЭКСПРЕССИИ ФАКТОРА РОСТА ЭНДОТЕЛИЯ СОСУДОВ И НЕОАНГИОГЕНЕЗА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЦЕРЕБРАЛЬНОЙ ИШЕМИИ В УСЛОВИЯХ КОМБИНИРОВАННОГО ПРИМЕНЕНИЯ ЭРИТРОПОЭТИНА И ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ
DOI: 10.22138/2500-0918-2021-18-4-262-269
УДК 616.831-005.4-085.357-085.849.19
Р.У. Гиниатуллин ¹, М.В. Осиков ¹, А.Н. Кузьмин²
¹ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет», г. Челябинск, Российская Федерация;
²ГБУЗ Областная клиническая больница №3, г. Челябинск, Российская Федерация
Резюме. Цель работы — исследовать влияние комбинированного применения эритропоэтина (ЭПО) и лазерного излучения (ЛИ) на морфометрические особенности экспрессии фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и неоангиогенеза при экспериментальной ишемии коры головного мозга (ИКГМ). Материалы и методы исследования. Работа выполнена на 120 белых нелинейных крысах. ИКГМ создавали путем диатермокоагуляции пиальных сосудов в сенсомоторной зоне. ЭПО применяли внутрибрюшинно в суммарной дозе 15000 МЕ/кг, ЛИ — однократно на область ишемического очага (970 нм, 2 мин). В работе использовались гистологические (окраска срезов гематоксилином и эозином), иммуногистохимические (определяли экспрессию VEGF), морфометрические (подсчитывали число клеток с экспрессией VEGF, число мелких кровеносных сосудов, измеряли площадь инфаркта), статистические методы исследования. Результаты исследования. Полученные результаты свидетельствуют, что в механизме нейропротекторного действия ЭПО выступает улучшение микроциркуляции за счет увеличения количества мелких кровеносных сосудов, а воздействие ЛИ приводит к увеличению как количества кровеносных сосудов, так и к повышению экспрессии VEGF в очаге повреждения. Выводы. 1. При экспериментальной ИКГМ у крыс в очаге повреждения повышается экспрессия VEGF и снижается количество мелких кровеносных сосудов на 3, 7, 14, 30 сутки эксперимента. 2. Системное применение при экспериментальной ИКГМ ЭПО в суммарной дозе 15000 МЕ/кг приводит к повышению количества мелких кровеносных сосудов, а локальное воздействие на область ишемии ЛИ — к повышению экспрессии VEGF и количества мелких кровеносных сосудов на 3, 7, 14, 30 сутки эксперимента; представительство кровеносных сосудов выше после воздействия ЛИ по сравнению с применением ЭПО. 3.Максимальная экспрессия VEGF и количество мелких кровеносных сосудов при экспериментальной ИКГМ выявлены после комбинированного применения ЭПО и ЛИ.
Ключевые слова: церебральная ишемия, фактор роста эндотелия сосудов, эритропоэтин, лазерное излучение
Конфликт интересов отсутствует.
Контактная информация автора, ответственного за переписку: Гиниатуллин Равиль Усманович prkom@chelsma.ru
Дата поступления 20.09.2021 г.
Образец цитирования: Гиниатуллин Р.У., Осиков М.В., Кузьмин А.Н. Морфометрические аспекы экспрессии фактора роста эндотелия сосудов и неоангиогенеза при экспериментальной церебральной ишемии в условиях комбинированного применения эритропоэтина и лазерного излучения. [Электронный ресурс] Вестник уральской медицинской академической науки. 2021, Том 18, №4, с. 262–269, DOI: 10.22138/2500-0918-2021-18-4-262-269
Введение
Показатели заболеваемости и смертности от инсульта среди лиц трудоспособного возраста занимают второе место. В РФ инсульт ежегодно развивается более чем у 450 тыс. человек, из них около 35% больных умирают в остром периоде заболевания [1]. До 80% от общего числа острых нарушений мозгового кровообращения приходится на ишемические инсульты. Доля последних в структуре общей смертности в нашей стране составляет 21,4%, а инвалидизация после перенесенного инсульта достигает 3,2 на 10000 населения, занимая первое место среди всех причин первичной инвалидности. Ведущим звеном патогенеза ишемического инсульта является ограничение кровоснабжения участка головного мозга, запуск патохимических процессов, приводящих к аносмической деполяризации клеточных мембран и гибели нейронов [1]. Вторичная дисфункция гематоэнцефалического барьера, в том числе дисфункция эндотелия микрососудистого русла, пролонгирует повреждение нейронов головного мозга. Известно, что при ишемическом инсульте в очаге повреждения компенсаторно повышается экспрессия фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), что индуцирует пролиферацию эндотелиоцитов и неоангиогенез в очаге повреждения. Применяемый в настоящее время арсенал нейропротекторных методов воздействия не удовлетворяет терапевтические потребности. В связи с этим, поиск факторов, активирующих на ранних этапах ишемического инсульта синтез и экспрессию VEGF является патогенетически обоснованным в связи с уменьшением площади очага ишемического повреждения в головном мозге и открывает новые перспективы в лечении ишемического инсульта. В частности, привлекает внимание эритропоэтин (ЭПО) — гликопротеин с плейотропными эффектами, основная часть которого синтезируется пери- и тубулярными клетками почек, а также нейронами, клетками микроглии, гепатоцитами и др. клетками [2, 3]. Открытие рецепторов для ЭПО на нейронах и эндотелиоцитах позволило рассматривать его в качестве эндогенного нейротропного агента при ишемическом повреждении головного мозга. Известно, что воздействие ЛИ увеличивает экспрессию VEGF, прежде всего, в сосудах микроциркуляторного русла, стимулирует неоангиогенез в зоне церебральной ишемии [4]. Цель работы — исследовать влияние комбинированного применения ЭП и ЛИ на морфометрические особенности экспрессии VEGF и неоангиогенеза при экспериментальной ИКГМ. Материалы и методы исследования Работа выполнена на 120 белых нелинейных половозрелых крысах обоего пола массой 220-250г. в экспериментальной операционной с соблюдением правил асептики и антисептики под общей анестезией препаратом «Золетил» (Virbac «Sante Animale», Фpaнция; 20 мг/кг) в соответствии с Европейской конвенцией о защите животных, используемых для экспериментов (ETSIN 123, 18 марта 1986 г.). Животные были разделены на 5 групп:1 группа (n=24) — контроль, проводили трепанацию черепа и вскрытие твердой мозговой оболочки без диатермокоагуляции пиальных сосудов (ложнооперированные животные); группа 2 (n=24) — модель ишемии коры головного мозга (ИКГМ) создавали путем диатермокоагуляции пиальных сосудов коры головного мозга в сенсомоторной зоне; группа 3 (n=24) — животные с ИКГМ, которым вводили внутрибрюшинно ЭПО; группа 4 (n=24) — животные с ИКГМ, у которых применяли ЛИ; группа 5 (n=24) — животные с ИКГМ, у которых применяли ЭПО в сочетании с ЛИ. ЭПО («Эпокрин 2000МЕ», ФГУП «Гос. НИИ ОЧБ» ФМБА России, Санкт-Петербург) вводили внутрибрюшинно трехкратно через 3, 24, 48 часов после индукции ИКГМ из расчета 5000 МЕ на 1 кг массы. ЛИ применяли через 2 часа после индукции ИКГМ однократно на область ишемического очага с расстояния 2,5 см от поверхности операционного поля в непрерывном режиме диодным лазером «ИРЭ-ПОЛЮС» (ООО НТО «ИРЭ-Полюс», Россия), длина волны 970 нм, моноволоконный световод 0,6 мм, мощность 1Вт, экспозиция 2 мин. В каждой группе исследования проводили на 3, 7, 14, 30 сутки. Головной мозг фиксировали в 10% нейтральном формалине и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином, по методу М. Бильшовского для выявления миелиновых волокон. На микроскопе «Leiсa DMRXA» (Германия) подсчитывали с помощью компьютерной программы анализа изображений «ImageScope M» (Россия, Москва) на условной единице площади количество мелких кровеносных сосудов при увеличении ×400, измеряли площадь инфаркта при увеличении ×200 (мкм²). Экспрессию VEGF в эндотелиоцитах в области ишемии мозга исследовали иммуногистохимическим методом с помощью набора специфических для крыс антител VEGF («SpringBio», США) на иммуногистостейнере «Bench Mark XT» («Ventana», USA) на условной единице площади в 10 случайно отобранных полях зрения при увеличении х400. Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью пакета прикладных программ IBM SPSS Statistics v. 19. Данные представлены в виде медианы (Ме) и квартилей [Q1-Q3]. Значимость различий между группами оценивали при помощи критериев Крускалла-Уолиса, Манна-Уитни, Фридмана. Результаты исследования и их обсуждение Установлено (табл. 1), что у крыс экспрессия VEGF в очаге ишемии увеличивается с 3 суток эксперимента (на 59% по медиане по сравнению с контрольной группой) и сохраняется на 7 сутки (увеличение на 105%), 14 сутки (увеличение на 200%), 30 сутки (увеличение на 295%) ИКГМ. Таблица 1 Экспрессия VEGF в очаге ИКГМ в условиях комбинированного применения ЭПО и ЛИ (количество клеток/усл. ед. площади Ме |Q1-Q3|) Table 1 VEGF expression in the focus and ICGM under the conditions of combined use of EPO and LR (number of cells/per unit area, Me |Q1-Q3|) Группы опытов Groups of experiments 3 сутки 3 day 7 сутки 7 day 14 сутки 14day 30 сутки 30 day 1. Контроль (n=24) Control 8,50 |7,00; 9,00| 9,50 |8,00; 10,00| 10,00 |8,75; 11,25| 10,00 |10,00; 12,00| 2. ИКГМ (n=24) IСGM 13,50* |12,75; 15,0| 19,50* |18,0; 20,25| 30,00* |28,75; 31,00| 39,50* |38,00; 41,25| 3. ИКГМ+ЭПО(n=24) ICGM+EPO 14,00* |12,75; 15,0| 20,00* |17,75; 21,25| 30,00* |28,75; 31,5| 40,50* |39,0; 42,25| 4. ИКГМ+ЛИ (n =24) IСGM+LR 17,00*’***’^ |16,0;17,25| 29,00|*’**’^ |27,75; 30,0| 40,50***’^ |39,0; 42,0| 54***’^ |50,7; 55,25| 5. ИКГМ+ЭПО+ЛИ (n=24)IСGM+EPO+LR 28,50*’**’^’° |27,75; 30,0| 41,0*’**’^’° |39,0; 22,0| 49,00*’**’^’° |47,75;55,25| 66,50*’**’^’° |59,75;69,25| Примечание: * — значимые (р<0,01) различия с группой 1; ** — с группой 2; ^ — с группой 3; ° — с группой 4. Note:* — significant (p<0.01) differences with group 1; * * — with group 2; ^ — with group 3; ° — with group 4. Таблица 2 Количество мелких кровеносных сосудов в очаге ИКГМ в условиях комбинированного применения ЭПО и ЛИ (на усл. ед. площади, |Q1-Q3|) Table 2 The number of small blood vessels in the focus and ICGM under the conditions of combined use of EPO and LR (per unit area, |Me Q1-Q3|) Группы опытов Groups of experiments 3 сутки 3 day 7 сутки 7 day 14 сутки 14 day 30 cутки 30 day 1. Контроль (n=24) Control 14,88 |11,65-16,07| 14,80 |13,31-15,67| 15,54 |14,08-16,70| 14,88 |14,16-15,51| 2. ИКГМ (n=24) IСGM 5,27* |4,43-5,54| 7,13* |6,41-7,87| 8,84* |7,73-10-14| 14,26* |11,93-16,01| 3.ИКГМ+ЭПО (n=24) ICGM+EPO 12,92* |11,15-13,86| 16,27* |15,62-17,04| 19,41* |18,52-20,42| 25,63* |23,76-27,60| 4. ИКГМ+ЛИ (n=24) IСGM+LR 15,90*’***’^ |15,32-17,31| 19,32*’**’^ |18,61-20,38| 23,13***’^ |21,95-25,73| 29,12***’^ |27,12-30,65| 5. ИКГМ+ЭПО+ЛИ (n=24)IСGM+EPO+LR 22,18*’**’^’° |21,09-22,74| 25,40*’**’^’° |24,85-26,10| 31,28*’**’^’° |30,36-33,83| 34,88*’**’^’° |33,10-36,51| Примечание: * — значимые (р<0,01) различия с группой 1; ** — с группой 2; — ^ с группой 3; ° — с группой 4. Note:* — significant (p<0.01) differences with group 1; * * — with group 2; ^ — with group 3; ° — with group 4 Таблица 3 Площадь инфаркта при ИКГМ в условиях комбинированного применения ЭПО И ЛИ (мкм², Me |Q1-Q3|) Table 3 The area of infarction in ICGM under the conditions of combined use of EPO and LR (mkm², Me |Q1-Q3|) 3 сутки 3 day 7 сутки 7 day 14 сутки 17 day 30 сутки 30 day Группа 2. ИКГМ (n=10) Group 2. ICGM (n=10) Группа 5. ИКГМ+ ЭПО+ЛИ (n=10) Group 5. ICGM+ EPO+LR (n=10) Группа 2. ИКГМ (n=10) Group 2. ICGM (n=10) Группа 5. ИКГМ+ ЭПО+ЛИ (n=10) Group 5. ICGM+EPO+LR (n=10) Группа 2. ИКГМ (n=10) Group 2. ICGM (n=10) Группа 5. ИКГМ+ ЭПО+ЛИ (n=10) Group 5. ICGM+ EPO+LR (n=10) Группа 2. ИКГМ (n=10) Group 2. ICGM (n=10) Группа 5. ИКГМ+ЭПО+ЛИ (n=10) Group 5. ICGM+ EPO+LR (n=10) 557,13 [541,38-582,23] 396,97* |388,64-407,02| 604,06 |593,48-625,80| 280,64* |270,34- 288,87| 734,66 |718,89- 744,00| 240,91* |230,83- 255,10| 994,65 |968,38-995,85| 194,55* |188,58-219,04| Примечание: * — значимые (р<0,01) различия с группой 2. Note: * — significant (p<0.01) differences with group 2. При этом отмечены значимые (p<0,01) изменения между экспрессией VEGF при ИКГМ на 7 сутки по сравнению с 3 сутками, на 30 сутки по сравнению с 3, 7, 14 сутками. При морфологической оценке очага повреждения при ИКГМ обнаружены уменьшение количественного представительства мелких кровеносных сосудов и увеличение площади инфаркта (табл. 2, 3). Так, на 3, 7, 14 сутки количество мелких сосудов значимо снижалось по сравнению с контрольной группой и не отличалось от нее на 30 сутки эксперимента, а площадь инфаркта, напротив, была максимальной. В динамике наблюдения число мелких сосудов на 14 сутки было выше (р<0,01), чем на 3, 7, 14 сутки наблюдения. Применение ЭПО при ИКГМ не приводит к статистически значимому (р<0,05) изменению экспрессии VEGF в зоне церебральной ишемии на 3, 7, 14, и 30 сутки опыта (табл. 1), а также площади инфаркта. Как и в группе крыс с ИКГМ, в динамике наблюдения за животными после введения ЭПО наблюдаются различия (р<0,01) между экспрессий VEGF на 7 сутки по сравнению с 3 сутками, на 14 сутки по сравнению с 3 и 7 сутками, на 30 сутки по сравнению с 3, 7, 14 сутками наблюдения. VEGF на 7 сутки по сравнению с 3 сутками, на 14 сутки по сравнению с 3 и 7 сутками, на 30 сутки по сравнению с 3, 7, 14 сутками наблюдения. На фоне применения ЭПО в очаге ишемического повреждения достоверно увеличивается представительство мелких кровеносных сосудов на 3, 7, 14 и 30 сутки наблюдения, незначительно снижается площадь инфаркта. В динамике эксперимента количество сосудов было выше (p<0,01) на 7 и 14 сутки по сравнению с 3 сутками, на 30 сутки — по сравнению с 3, 7, 14 сутками. Воздействие ЛИ через 2 часа от индукции ИКГМ на зону церебральной ишемии вызывает достоверное повышение экспрессии VEGF на 3 сутки (на 26% по медиане по сравнению с группой крыс с ИКГМ), 7 сутки (на 49%), 14 сутки (на 30%), 30 сутки (на 37%). Примечательно, что от 3 к 30 суткам наблюдения экспрессия VEGF прогрессивно увеличивается (p<0,01), достигая максимальных значений на 30 сутки наблюдений. В то же время площадь инфаркта изменяется незначительно. Отметим, что во все сроки наблюдения в группе крыс с ИКГМ, получивших ЛИ, экспрессия VEGF статистически значимо выше, чем в группе крыс с ИКГМ и введением ЭПО. При оценке количества мелких кровеносных сосудов в очаге повреждения при ИКГМ в условиях воздействия ЛИ выявлено значимое увеличение их представительства на 3, 7, 14 и 30 сутки наблюдения при сравнении с контрольной группой. Показательно, что количество сосудов в очаге церебральной ишемии в группе крыс с ИКГМ после воздействия ЛИ значимо превышает количество сосудов в группе крыс с ИКГМ после применения ЭПО на 3, 7, 14 и 30 сутки эксперимента. Комбинированное применение ЛИ и ЭПО при экспериментальной ИКГМ приводит к выраженной экспрессии VEGF: увеличению на 3 сутки на 111% по медиане по сравнению с группой крыс с ИКГМ, на 7 сутки — на 110%, на 14 сутки — на 63%, на 30 сутки — на 68%. У данной группы крыс количество мелких кровеносных сосудов в очаге церебральной ишемии статистически значимо превышает количество сосудов в группах крыс с ИКГМ, а также у крыс с ИКГМ и воздействием ЛИ или применением ЭПО на 3, 7, 14 и 30 сутки эксперимента. В эти же сроки достоверно уменьшается площадь инфаркта в 5 группе опытов по сравнению со 2 группой (табл. 3). Обнаруженные изменения экспрессии VEGF и количества мелких кровеносных сосудов в очаге повреждения при экспериментальной ИКГМ являются отражением фокальной ишемии головного мозга и нарушения целостности ГЭБ. При этом одним из основных компенсаторных механизмов на повреждающее воздействие ишемических изменений в ткани головного мозга является экспрессия VEGF в ишемизированной ткани, способствующая пролиферации эндотелиоцитов и в конечном итоге к неоангиогенезу. Применение ЭПО при ИКГМ не приводит к повышению экспрессии VEGF, но активирует неоангиогенез, увеличивая количество мелких кровеносных сосудов в ишемическом очаге. Это позволяет предположить, что эффекты ЭПО не зависят от экспрессии VEGF, а обусловлены прямым рецептор-опосредованным влиянием ЭПО на эндотелиоциты [5]. В эндотелиоцитах в условиях гипоксии нервной ткани комплекс рецептора ЭПО и βCR соединяется с рецептором для VEGF, что стимулирует неоангиогенез церебральных сосудов и ЭПО-опосредованный синтез NO эндотелиоцитами [6]. Описаны пролиферативный и хемотаксический эффекты ЭПО в отношении эндотелиоцитов, особенно выраженные в постишемическом периоде. Полагаем, что указанные механизмы действия ЭПО, а также увеличение экспрессии VEGF при воздействии ЛИ, оказывают синергичный эффект в отношении неоангиогенеза в очаге ишемии при ИКГМ. Следует подчеркнуть, что в механизме нейропротекторного действия ЭПО выступают улучшение микроциркуляции за счет увеличения количества мелких кровеносных сосудов в очаге повреждения, восстановление нейронов и уменьшение площади инфаркта [7], снижение количества лейкоцитов в крови, что приводит к частичному восстановлению неврологического и этологического статуса [8, 9, 10]. Специфическим для ЭПО является эритропоэтический эффект — увеличение количества эритроцитов, концентрации гемоглобина в крови, а для ЛИ — повышение экспрессии VEGF в очаге повреждения [11, 12 ]. Полученные данные [7] могут быть использованы при экспериментально-клинических исследованиях, направленных на разработку новых методов лечения ИКГМ с использованием ЭПО и ЛИ. Выводы 1. При экспериментальной ИКГМ у крыс в очаге повреждения повышается экспрессия VEGF, снижается количество мелких кровеносных сосудов и увеличивается площадь инфаркта на 3, 7, 14, 30 сутки эксперимента. 2. Системное применение при экспериментальной ИКГМ ЭПО в суммарной дозе 15000 МЕ/кг приводит к повышению количества мелких кровеносных сосудов, снижению площади инфаркта, а локальное воздействие на область ишемии ЛИ — к повышению экспрессии VEGF и количества мелких кровеносных сосудов на 3, 7, 14, 30 сутки эксперимента; представительство кровеносных сосудов выше после воздействия ЛИ по сравнению с применением ЭПО. 3. Максимальная экспрессия VEGF, увеличение количества мелких кровеносных сосудов и снижение площади инфаркта при экспериментальной ИКГМ выявлены после комбинированного применения ЭПО и ЛИ.
ЛИТЕРАТУРА
1. Гусев Е.И., Скворцова В.И., Мартынов М.Ю., Камчатнов П.Р. Церебральный инсульт: проблемы и решения. Вестник РГМУ 2006. №4. С. 28-32.
2. Осиков М.В. Влияние эритропоэтина на процессы свободно радикального окисления и экспрессию гликопротеинов в тромбоцитах при хронической почечной недостаточности. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2014. №1. С. 30-33.
3. Осиков М.В., Телешева Л.Ф., Агеев Ю.И. Антиоксидантный эффект эритропоэтина при экспериментальной хронической почечной недостаточности. Бюллетень экспериментальной биологии и медицины 2015. №8. 162-165.
4. Головнева Е.С., Попов Г.К. Механизмы формирования нового сосудистого русла в ответ на высокоинтенсивное лазерное воздействие. В кн.: Козель А.И., Гиниатуллин Р.У., Головнева Е.С., Голощапова Ж.А.(ред.) Обоснование применения лазерных технологий в хирургии (экспериментальные исследования с внедрением их в клиническую практику). Челябинск: ООО «Пирс», 2009, С.125– 165.
5. Kimáková P., Solár P., Solárová Z., Komel R., Debeljak N. Erythropoietin and Its Angiogenic Activity. Int. J. Mol. Sci. 2017. V.18. Р. 1519-14.
6. Lombardero M., Kovacs K., Scheithauer B.W. Erythropoietin: A hormone with multiple functions. Pathobiology 2011. V.78. P. 41-53.
7. Козель А.И., Попов Г.К., Гиниатуллин Р.У., Астахова Л.В., Кузьмин А.Н., Игнатьева Е.Н., Кравченко Т.Г. Способ лечения ишемии головного мозга в эксперименте. Пат. РФ, № 2495688; 2013.
8. Кузьмин А.Н. Нейропротекторные аспекты комбинированного применения эритропоэтина и лазерного излучения при экспериментальной ишемии коры головного мозга. Автореф. дис…канд. мед. наук. Москва, 2019. 24 с.
9. Осиков М.В., Гиниатуллин Р.У., Кузьмин А.Н. Оценка неврологического статуса и микроциркуляции при экспериментальной ишемии коры головного мозга в условиях комбинированного применения эритропоэтина и лазерного излучения. Здоровье и образование в XXI веке. – 2017. Т. 19, № 9. С. 175-179.
10. Осиков М.В., Гиниатуллин Р.У, Кузьмин А.Н. Влияние эритропоэтина и лазерного излучения на неврологический статус и морфологию очага повреждения в динамике экспериментальной церебральной ишемии. Современные проблемы науки и образования. 2017. № 5 https:// scienceeducation.ru/ru/article/view?id=26782.
11. Осиков М.В., Гиниатуллин Р.У., Кузьмин А.Н. Нейропротекторный эффект эритропоэтина при экспериментальной ишемии головного мозга. Человек. Спорт. Медицина, 2017. Т. 17. № 4. С. 41-49.
12. Осиков, М.В., Гиниатуллин Р.У., Кузьмин А.Н., Бойко М.С., Байсакалова Е.Д. Гематологические показатели при экспериментальной ишемии коры головного мозга в условиях применения эритропоэтина. Современные проблемы науки и образования. 2018. № 5 https:// scienceeducation.ru/ru/article/view?id=27944.
Авторы
Гиниатуллин Равиль Усманович
ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет», г. Челябинск Доктор медицинских наук, профессор, профессор кафедры патологической анатомии и судебной медицины 454092, Российская Федерация, Челябинск, ул. Воровского, 64 prkom@chelsma.ru
Осиков Михаил Владимирович
ФГБОУ ВО «Южно-Уральский государственный медицинский университет», г. Челябинск Доктор медицинских наук, профессор, зав. кафедрой патологической физиологии 454092, Российская Федерация, Челябинск, ул. Воровского, 64
Кузьмин Андрей Николаевич
Кандидат медицинских наук, зав. нейрохирургическим отделением №1 ГБУЗ Областная клиническая больница №3, г. Челябинск 454021, Российская Федерация, г. Челябинск, пр. Победы, д. 287
Это произведение доступно по лицензии Creative Commons «Attribution-NonCommercial» («Атрибуция — Некоммерческое использование») 4.0 Всемирная.